Species Identification of Meats and Meat Products by PCR

Abstract

PCR法による肉種鑑別を行う目的で,既知のウシ,ブタ,ニワトリのミトコンドリアD-loop近傍の塩基配列の相同性を調査し,それらの3種を対象に3セットのプライマーBFとBR,PF(BFと同一のもの)とPR,CFとCRを合成した.3種食肉と各種肉製品から抽出したDNAを鋳型とし,94°C-2分間,66-68°C-2分間,72°C-3分間で35回の繰り返し反応でPCR増幅を行った.増幅されたDNAは2%アガロースゲル電気泳動を用いて分析した.その結果,設計通りにウシ,ブタ,ニワトリに特異的なDNA断片(518,321,400bp)が増幅された.この方法を生肉,加熱肉及びいくつかの肉製品について適用したところ,試料に含まれていると推定される種特異的なDNA断片が検出された.さらに,ウシ,ブタ,ニワトリの3セットプライマーを混合することで,3種類の食肉の存在を一度の分析で鑑定できた.羊肉を牛肉と誤認する可能性は否定された.混合DNAを用いてウシ,ブタ,ニワトリの複数種のDNAの検出限度について検討した結果,混合サンプル中のそれぞれの検出限界は0.1%,0.001%,1%で,いずれの場合でも肉製品への他種肉の混合度合を知るに十分な感度を有していた.