Quantitative determination of tocopherols in single seeds of rapeseed (Brassica napus L.)

Abstract

A high-performance liquid chromatography (HPLC) method was developed to determine tocopherols in single seeds of oilseed rape (Brassica napus L.). Single seeds were extracted with isooctane, centrifuged, and the overlayer extract injected into the HPLC instrument without further purification. Separation was performed on a diol-column (250 mm × 3 mm I.D.) using a mobile phase consisting of 94% isooctane and 6% tert-butyl methyl ether. Quantification of individual tocopherols was done by fluorescence detection and with β-tocopherol as internal standard. The standard error (SE) of the present method for total tocopherol content, as determined with 30 ground samples of Samourai (mean = 304 mg kg -1 dry seed) and 20 ground samples of Lirabon (mean = 350 mg kg -1 dry seed), was 9.5 mg tocopherol/kg dry seed. The SEs of the method for the determination of α- and γ-tocopherol percentages were 1.2% and 1.3%, respectively. The low SE values indicate that the method can be effectively used to detect small differences for tocopherol content and composition in studies requiring the analysis of reduced amounts of plant material. In particular, the comparison between the SE of the method and the SD of single seeds within individual plants of Samourai (36.8 mg kg -1 dry seed) and Lirabon (37.6 mg kg -1 dry seed) shows the potential of the present method for the detection of the tocopherol content within plant differences. Quantitative Bestimmung der Tocopherole in einzelnen Rapskörnern (Brassica napus L.). Eine HPLC-Methode wurde für die Bestimmung der Tocopherole in Einzelkörnern von Raps (Brassica napus L.) entwickelt. Einzelne Rapskörner wurden mit Isooctan extrahiert, zentrifugiert und dann der Überstand ohne weitere Vorbereitung in die HPLC injiziert. Die Trennung wurde an einer Diol-Säule (250 mm × 3 mm i.D.) durch Elution mit 94% Isooctan und 6% tert.-Butylmethylether durchgeführt. Die individuellen Tocopherole wurden mit einem Fluoreszenzdetektor erfaßt, und für die Quantifizierung wurde β-Tocopherol als innerer Standard benutzt. Der Standardfehler (SE) der Methode für die Bestimmung des gesamten Tocopherolgehalts, der mit 30 Proben von Samourai (Mittelwert = 304 mg kg-1 trockener Samen) und 20 Proben von Lirabon (Mittelwert = 350 mg kg-1 trockener Samen) ermittelt wurde, betrug 9,5 mg Tocopherol/kg trockener Samen. Der SE der Methode für die Bestimmung der Konzentrationen an α- und γ-Tocopherol war jeweils 1,2% und 1,3%. Die niedrigen SE-Werte zeigen, daß die Methode für die Erfassung geringer Unterschiede in Tocopherolgehalt und -zusammensetzung in Einzelkörnern effektiv genutzt werden kann, insbesondere bei Untersuchungen, in denen sehr wenig Pflanzenmaterial zur Verfügung steht. Der Vergleich zwischen dem Standardfehler und der Standardabweichung (SD) einzelner Rapskörner, die von einer Pflanze von Samourai (SE = 36,8 mg kg-1 trockener Samen) und von Lirabon (SD = 37,6 mg kg-1 trockener Samen) stammen, zeigt das Potential der Methode für die Erfassung von Unterschieden im Tocopherolgehalt der Samen einer Einzelpflanze.