Analysis of peptide profiles of casein hydrolysates prepared with pepsin, trypsin and subtilisin

Abstract

Aiming the use of protein hydrolysates for dietetic purposes, casein was hydrolysed by using pepsin (P), isolated and in association with trypsin (T) and subtilisin (S). Sixteen hydrolysates were prepared and their peptide profiles were characterized. The hydrolysates were fractionated by size-exclusion HPLC, and the rapid Correct Fraction Area method was used for quantifying peptides and free amino acids. The effect of E:S ratio, temperature and pH on the chromatographic pattern was evaluated for the isolated action of pepsin, while the order of enzyme addition and the time of enzyme action were analysed in case of the enzyme associations. The results showed that the most suitable chromatographic pattern for dietetic purpose was obtained by the association of the three enzymes in the following conditions: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3% ) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), at 37 °C. RESUMEN. “Analisis del Perfil Peptidico de los Hidrolizados de Caseina Preparados con Pepsina, Tripsina y Subtilisina”. La obtencion de hidrolizados proteicos para fines dieteticos en base a caseina fue el objetivo de este trabajo. La caseina fue hidrolizada usando pepsina (P) aislada y en asociacion con tripsina (T) y subtilisina (S). Se prepararon dieciseis hidrolizados y se caracterizaron sus perfiles peptidicos. Los hidrolizados fueron fraccionados por exclusion molecular utilizando cromatografia liquida de alta resolucion (HPLC). El metodo rapido del Area Corregida de la Fraccion fue usado para cuantificar los peptidos y los aminoacidos libres. Se evaluaran el efecto de la relacion E:S, la temperatura y el pH en el perfil cromatografico para la accion de pepsina aislada, mientras que el orden de adicion y el tiempo de accion de la enzima se analizaron en el caso de las asociaciones de enzimas. Los resultados mostraron que el perfil cromatografico mas conveniente para el proposito dietetico se obtuvo por la asociacion de las tres enzimas en las siguientes condiciones: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3%) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), a 37 °C.