Analysis of major bovine milk proteins by on-line high-performance liquid chromatography and electrospray ionization-mass spectrometry

Abstract

Proteins from skim milk, paracaseinate and whey have been successfully analyzed by reverse-phase high-pertormance liquid chromatography (RP-HPLC) cou pied with electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). The major milk proteins were identified by comparison of molecular masses determined by ESI-MS to molecular masses calculated from amino acid composition deduced from primary structures and cDNA sequences for some proteins. This method has permilted the simultaneous identification of caseins and whey protein variants. Observed molecular masses of major milk proteins were found to be 19038.0 2.2 Da forK-CN A-l P (number of experiments n = 6); 19007.0 1.1 Da for K-CN B-1P (n = 4); 25230.0 2.1 Da for as2-CN A (n = 9); 23617.2 1.3 Da for as1-CN B-8P (n = 14); 24 092.0 1.7 Da for ~-CN B-5P (n = 6); 24 025.3 1.0 Da for ~-CN A 1-5P (n en acides amins de chaque protine, et des squences dduites de l'ADNc quand elles existent. Cette mthode permet l'identification simultane des principaux variants gntiques des casines et des protines solubles. Les masses molculaires des principales protines laitires dtermines avec une prcision de 0,01% sont les suivantes: 19 038,0 2,2 Da pour x-Cb; A-1P (nombre d'essais, n = 6); 19 007,0 1,1 Da pour x-Cv B-1P(n =4); 25230,0 2, 1 Da pour as2-CN A (n = 9); 23 617,2 1,3 Da pourusl-CN B-8P (n = 14);24 092,0 1,7 Da pourfJ-CN B-5P (n = 6); 24 025,31,0 Da pourfJ-CN AI-5P (n = 14); 23 984,810,7 Da pourfJ-CN A2-5P (n = 14); 18 278,3 2,2 Da pour la forme monomrique de la fJ-LG B (n =5); 18364,8 1,6 Da pour la forme monomrique de la fJ-LG A (n =5); 14 179,2 3,14 Da pouru-LA (n = 5). Par ailleurs, le couplage entre la chromatographie liquide haute pettotmence et la spectromtrie de masse source d'ionisation electrospray constitue un excellent moyen pour tudier la protolyse se produisant au cours de certains traitements technologiques. Cela est illustr par l'tude de la coagulation du lait par la chymosine et la protase d'Endothia parasitica. spectromtrie de masse 1 electrospray 1 protine laitire 1 variant gntique 1 enzyme coagulante 1 paracasinate 1 coagulation 1 couplage HPLC/E51-M5 207