Scission et réassociation des isoagglutinines traitées par des agents réducteurs des ponts disulfures. Préparation d'anticorps mixtes

Abstract

Summary Thiols and other reducing agents, such as sodium borohydride, dissociate 19 S isoagglutinins into 6 S subunits with concomitant loss af agglutinating activity. Using thiols little or no activity was recovered upon reoxidation, whereas the effert of borohydride was reversible; in some instances up to 100% of the original activity was recoverd upon dialysis in the presence of oxygen. The dissociation produrts were alkylated with iodoacetamid to block the sulf‐hydryl groups and prevent reassociation. In a new serie of experiments a mixture of isoagglutinins anti‐A and anti‐B was treated with borohydride and reaggregated by dialysis. It was possible to recover a fraction of antibodies with double specificity, bearing on the same molecule anti‐A as well as anti‐B activity. These “mixed” antibodies were brought into evidence by absorption and elution methods and also by mixed agglutination between type A buccal epithelial cells and type B erythrocytes. Zusammenfassung Anti‐A und Anti‐B Isoagglutinine des 19 S‐Typs können durch Disulfid‐spaltende Reduktionsmittel wie Merkaptane oder Borhydrid in inaktive Untereinheiten zerlegt werden. Während die Aktivität nach Behandlung mit Merkaptanen nicht mehr nachgewiesen werden konnte, stieg sie bei den mit Borhydrid behandelten Proben nach oxydativer Dialyse an, in einigen Fällen bis zum Ausgangswert. Die Spaltprodukte, deran Sulfhydrylgrnppen zur Verhinderung der Reaggregierung mit Monoiodazetamid blockiert wurden, agglutinieren nicht mehr, sind aber befähigt, die Agglutination durch native Isoagglutinine zu hemmen. Durch Behandlung eines Gemisehes von Anti‐A und Anti‐B‐Isoagglutininen mit Borhydrid und anschlieβlender Dialyse in Gegenwart von Sauerstoff gelang die Her‐stellung von hntikörpern doppelter Spezifität. Letztere wiesen auf demselben Molekül sowohl Anti‐A als auch Anti‐B‐Aktivität auf. Sie konnten einerseits mit Absorptions‐ und Elutionsmethoden, andererseits durch gemischte Agglutination von Epithelzellen der Blutgruppe A und Typ B‐Erythrozyten nachgewiesen werden. Résumé L'emploi de réducteurs des ponts disulfures tels que les thiols ou le borohydrure de sodium ont permis de scinder les isoagglutinines anti‐A et anti‐B en subunités avec perte du pouvoir agglutinant. Avec les thiols l'activité n'a pas pu être récupérée de façon satisfaisante, tandis qu'avec le borohydrure le titre remonte après dialyse oxydative jusqu'à atteindre parfois sa valeur initiale. Les produits de scission que l'on acyle au moyen de monoiodoacétamide pour bloquer les groupes sufhydryles et empêcher ainsi une réassociation ne sont plus agglutinants, mais sont inhibiteurs. Dans une seconde série d'expériences, en traitant au borohydrure un mélange d'agglutinines anti‐A et anti‐B et en laissant les suhunités se réaggréger par dialyse il a été possible d'obtenir une certaine proportion d'anticorps à double spécificité, c'est‐à‐dire portant sur la même molécule à la fois un site anti‐A et un site anti‐B. Ces agglutinines «mixtes» ont été mises en évidence par des méthodes d'absorption et d'élution ainsi que par agglutination de cellules épithéliales avec des globules rouges.