Detection of<i>Mi-1.2</i>gene for resistance to root—knot nematode in tomato—breeding lines developed for resistance to begomovirus in Morocco

Abstract

Abstract A PCR based method was developed to detect the Mi-1.2, a resistant gene to root—knot nematode, in begomovirus—resistant breeding lines developed in Morocco. Two—step PCR protocol were tested on 14 experimental resistant tomato breeding lines developed in Morocco and known resistant and susceptible cultivars. The first PCR—step involved the PCR primers (PM3Fb/PM3Rb) specific for the region 3′ of the Mi-1.2 and REX primers. Every plant DNA tested gave a 720-bp fragment for the REX primers, but only those plants with Mi-1.2 gene gave a 500-bp fragment with PM3Fb/PM3Rb primers. To distinguish the heterozygous genotypes for the Mi-1.2, a second PCP—step was used with primers (PMiF3/PMiR3). All the 14 tested tomato breeding lines developed in Morocco have the Mi-1.2 gene, and thus should be resistant to root—knot nematode. Nine of them are homozygous (Lp.-Mi-1/Lp.-Mi-1) and the others are heterozygous plants with Lp-Mi-1/Ih902-Mi-1 genotype. Résumé Des marqueurs moléculaires de type PCR ont été développés pour détecter le gène de résistance aux nématodes à galle Mi-1.2 dans des lignées de tomates développées au Maroc pour la résistance au begomovirus. Le protocole développé s'effectue en deux étapes. La première étape consiste en une multiplexe PCR combinant les amorces REXF1/REXR2, identifiées par Williamson et al. (1994), avec les amorces PM3Fb/PM3Rb spécifiques au gène Mi-1.2. Les amorces PM3Fb/PM3Rb ne doivent amplifier un fragment de 500-pb que si le gène Mi-1.2 est présent. Toutes les lignées de tomates développées au Maroc possèdent le gène de résistance aux nématodes à galle. De ce fait, elles sont à la fois résistantes au TYLCV et aux nématodes à galle. Pour mettre en évidence l'hétérozygotie, une deuxième étape de PCR impliquant les amorces PMiF3/PMiR3 s'avérait nécessaire. Parmi ces lignées, neuf sont résistantes homozygotes (Lp.-Mi-1/Lp.-Mi-1) et les autres sont hétérozygotes avec le génotype Lp-Mi- 1/Ih902-Mi-1. Key words: begomovirus resistant breeding line Mi-1.2 generoot-knot nematodesMots clés: lignée de tomate résistante aux TYLCVgène Mi-1.2 nématodes à galles