Isolation of mesophyll protoplasts of the genus Coffea

Abstract

Se describe un metodo rapido para el aislamiento de protoplastos a partir de hojas de cafe, probandose diferentes enzimas en varias combinaciones. Es posible liberar abundante cantidad de protoplastos a partir de hojas jovenes, provenientes de varias lineas y cruzamientos, de las especies Coffea arabica y C. canephora, mediante su incubacion durante 4 horas en celulasa (3%), pectoliasa (0.5%) y manitol (0.6 molal) a pH 5.8. Los protoplastos se filtraton y lavaron varias veces en agua de mar (85%) y fue necesario resuspenderlos en percoll (70%) debido a su densidad. Los protoplastos sobreviven varias semanas, y regeneran pared celular. En uno de los medios (A 43), despues de 2 semanas, se observan algunas divisiones. Se estan probando varios medios de cultivo en diferentes concentraciones de hormonas