The reversible denaturation of DNA and its use in studies of nucleic acid homologies and the biological relatedness of microorganisms

Abstract

Les chaines complementaires de la molecule d’ADN, qui sont liees l’une a l’autre par des liaisons hydrogene au niveau des paires de bases adenine-thymine et guanine-cytosine, peuvent etre separees par l’action de la chaleur, d’un acide, d’une base ou du formamide. Cette separation des deux chaines d’ADN et leur renaturation specifique par refroidissement consecutif a des temperatures inferieures a la temperature de « fusion », ont rendu possible la formation de molecules hybrides entre les ADN provenant de souches de microorganismes apparentes. On peut reconnaitre les molecules hybrides par centrifugation en gradiant de densite en CICs. La densite de l’hybride est intermediaire entre celle des deux constituants : le lourd (marque avec 15 N et le deuterium) et le leger, ADN normal. Pour que la formation d’un hybride puisse avoir lieu, la condition minimale est que l’ensemble des bases qui rentre dans la constitution des echantillons d’ADN soit semblable et que son heterogeneite de constitution soit relativement faible. Ainsi il a ete trouve que seuls les microorganismes genetiquement voisins possedent un ADN qui donne une molecule hybride in vitro par denaturation thermique et recombinaison ulterieure. On pense que la compatibilite genetique et la formation d’hybrides in vitro dependent d’une sequence homologue des bases et que la formation d’hybrides indique une telle sequence et devrait permettre de prevoir des relations genetiques et taxonomiques etroites.