Studies on the Pathogenesis of Hog Cholera¹

Abstract

Summary The route of virus spread in pigs, following oral exposure with virulent hog cholera virus three hours to seven days previously, was studied. An accumulation method (AM), the cryostat section (CRS) and coverslip cell culture (CCC) fluorescent antibody techniques (FAT) were used. By the AM virus was demonstrated in the tonsil and blood as early as seven and sixteen hours post exposure, respectively. Virus titre in the tonsil was found to remain at a high level from day three up to day seven. It was exceeded by virus contents in the blood and spleen and to a lesser extent by those of the mandibular, retropharyngeal, parotid and mesenteric lymph nodes between days five and seven. The tonsil, being the first target organ for HCV, is the tissue of choice for the early detection of virus by routine CRS and cell culture FA methods. Other tissues recommended for the early demonstration of virus are the pancreas, spleen, lymph nodes, blood and eventually the intestinal mucosa. The routes by which HCV spreads from the tonsil are discussed. Virus excretion in the faeces and urine started to occur at days six and seven respectively. It was concluded that virus discharge was initiated after a sufficiently high level of virus concentration in the gastro‐intestinal and urogenital tracts was reached. In contrast to the AM, CR sections and CC cultures were negative on all samples collected at twenty‐four hours. Apparently the quantity of inoculum used was of great importance. Positive CR sections substantiated by virus isolations were first observed at 2 × twenty‐four hours. Following this period a progressive increase in the number of positive samples found by both FA techniques was recorded. In all instances virus was never isolated from the gall. Zusammenfassung Untersuchungen zur Pathogenese der Schweinepest I. Nachweis von Schweinepestvirus nach oraler Applikation Es wurde der Weg der Virusausbreitung in Schweinen nach oraler Applikation von vollvirulentem Schweinepestvirus von der 3. Stunde an bis zum 7. Tag untersucht. Als Nachweismethoden dienten ein Anreicherungsverfahren (AM) und die fluoreszierende Antikörpertechnik (FAT), angewandt an Kryo‐statschnitten (CRS) und Deckglas‐Zellkulturen (CCC). Über das Anreicherungsverfahren wurde Virus in den Tonsillen und im Blut bereits 7 bzw. 16 Stunden nach der Ansteckung nachgewiesen. Der Virustiter in den Tonsillen hielt sich vom 3. bis zum 7. Tag p. inf. auf einem konstanten, hohen Wert. Er wurde nur vom Virusgehalt des Blutes und der Milz und in geringerem Maße von dem in Mandibular‐, Retropharyngeal‐, Parotis‐ und Mesenteriallymphknoten zwischen dem 5. und 7. Tag übertroffen. Die Tonsillen, als erstes Haftungsorgan des Schweinepestvirus, sind das bevorzugte Gewebe für den frühen Nachweis des Virus mittels CRS oder CCC FA‐Methode. Als beste Gewebe können zur Frühdiagnose Pankreas, Milz, Lymphknoten, Blut und eventuell die Darmschleimhaut empfohlen werden. Die Wege, über die sich das Virus von den Tonsillen aus ausbreitet, werden diskutiert. Die Virusausscheidung über Kot und Urin begann am 6. bzw. 7. Tag. Daraus wurde geschlossen, daß die Ausscheidung erst dann beginnt, wenn ein genügend hoher Virusgehalt im Gastro‐Intestinaltrakt und Urogenitaltrakt erreicht ist. Im Unterschied zur AM verliefen die Nachweise über CRS‐ und CCC‐Verfahren bei allen bis zur 24. Stunde entnommenen Proben negativ. Offen‐sichtlich war die verabreichte Virusdosis sehr entscheidend. Positive Kryostat‐schnitte, bestätigt über die Virusisolierung, wurden erst nach zweimal 24 Stunden gefunden. Dieser Periode folgte eine ständige Zunahme positiver Befunde an Proben, die nach beiden FA‐Verfahren untersucht wurden. Aus der Galle konnte nie Virus isoliert werden. Résumé Recherches sur la pathogénèse de la peste porcine I. Mise en évidence du virus de la peste porcine après application orale On a examiné la route de dispersion du virus chez le porc à partir de la 3 e heure et jusqu'au 7 e jour après application orale d'un virus virulent de la peste porcine. Les méthodes de mise en évidence furent un procédé d'enrichissement (AM) et la technique des anticorps fluorescents (FAT) appliquée sur des coupes cryostatiques (CRS) et des cultures cellulaires sur la‐melles de verre (CCC). Lors du processus d'enrichissement, on a mis en évidence le virus dans les amygdales et dans le sang déjà 7 à 16 heures après l'infection. La quantité de virus dans les amygdales resta d'une valeur élevée et constante du 3 e au 7 e jour après l'infection. Cette quantité fut supérieure dans le sang et la rate et dans une moindre mesure dans les ganglions mandilulaires, retropharyngés, parotidiens et du mésentère entre le 5 e et le 7 e jour. Les amygdales se sont révélées être le tissu de choix pour la détection précoce du virus de la peste porcine avec les méthodes CRS, CCC et FAT. Les meilleurs tissus pouvant être recommandés pour un diagnostic précoce sont le pancréas, la rate, les ganglions, le sang et éventuellement la muqueuse intestinale. On discute les voies de dissémination du virus à partir des amygdales. L'élimination du virus dans les fèces et l'urine a commencé le 6 e et le 7 e jour. On en a tiré la conclusion que l'élimination ne commence que lorsque la quantité de virus est suffisamment élevée dans le tractus gastrointestinal et uro‐génital. A la différence de la méthode AM, tous les échantillons pris dans les premières 24 heures se sont révélés négatifs selon les méthodes CRS et CCC. La dose de virus donnée s'est révélée apparemment déterminante. Les coupes cryostatiques positives avec FAT, confirmées par l'isolation du virus, ne se rencontraient qu'à partir de 40 heures. Une augmentation fixe des cas positifs a suivi cette période sur les échantillons examinés selon les deux procédés FAT. On n'a jamais isolé de virus à partir de la bile. Resumen Estudios sobre la patogenia de la peste porcina I. Identificación del virus peste porcina tras aplicación oral Se estudió la vía de propagación de los virus en cerdos tras la aplicación oral de virus peste porcina totalmente virulento desde la tercer hora hasta el 7° día. Como métodos de identificación se utilizaron la técnica de enrique‐cimiento (TE) y la de anticuerpos fluorescentes (TAF), empleándose en cortes criostáticos (CCR) y cultivos celulares sobre portaobjetos (CCP). Por medio de la técnica de enriquecimiento ya se identificó el virus en las tonsilas y en sangre a las 7 resp. 16 horas después del contagio. El título de virus en las tonsilas se mantuvo desde el tercer hasta el 7° día p. inf. en un nivel elevado constante. Solo fué rebasado por el contenido en virus de la sangre y bazo y en cantidad reducida por el mismo en los ganglios linfáticos mandibulares, retrofaríngeos, parotídeos y mesentéricos entre el 5° y 7° día. Las tonsilas son como primer organo de retención del virus peste porcina el tejido de elección para la identificación precoz del virus mediante CCR o CCP y la TAF. Como tejidos mejores para el diagnóstico precoz se recomiendan el páncreas, bazo, ganglios linfáticos, sangre y eventualmente la mucosa intestinal. Se discuten las vías a través de las cuales se difunde el virus a partir de las tonsilas. La eliminación de virus con las feces y orina se inició el 6° resp. 7° día. De aquí se saca en conclusión que la excreción comienza cuando se ha alcanzado un contenido en virus suficientemente elevado en los tractos gastrointestinal y urogenital. En contraposición a la TE discurrieron negativas las identificaciones por medio de CCR y CCP en todas las muestras recogidas hasta las 24 horas. Al parecer, era muy decisiva la dosis de virus administrada. Cortes criostáticos TAF‐positivos, confirmados a través del aislamiento de virus, solo se hallaron tras dos veces 24 horas. A este periodo le siguió un aumento constante de resultados positivos en muestras examinadas con arreglo a ambas técnicas TAF. A partir de la bilis no se logró aislar nunca virus.