Bacterial expression of full-length and truncated forms of cytokine EMAP-2 and cytokine-like domain of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase

Abstract

В вектор для бактериальной экспрессии рЕТ32а клонированы и секвенированы вставки ДНК, кодирующие полноразмерные цитокин ЕМАР-2 и цитокинподобный домен тирозил-тРНК синте­тазы (TyrRS) млекопитающих, а также их делетированные с СООН- и NH₂-концов формы. Получена бактериальная экспрессия всех клонов, и для полноразмерных форм осуществлены аффинная очистка до гомогенного состояния, протеолитическое удаление константной части слитых рекомбинантных белков, а также тестирование их биологической активности в реакции индукции тканевого фактора. Полноразмерная форма цитокинподобного домена TyrRS не взаимо­действует с поликлональными антителами к ЕМАР-2 в вестерн-блот-анализе. Делается вывод о пригодности полученной панели рекомбинантных белков для сравнительного изучения локализации функционально важных участков белков