Quantitation of Marek's Disease and Chicken Anemia Viruses in Organs of Experimentally Infected Chickens and Commercial Chickens by Multiplex Real-Time PCR

Abstract

The worldwide distribution of chicken anemia virus (CAV) and Marek's disease virus (MDV) is well documented. In addition to their economic significance in single- or dual-virus infections, the two viruses can often accompany various other pathogens and affect poultry health either directly, by causing tumors, anemia, and delayed growth, or indirectly, by aggravating other diseases, as a result of their immunosuppressive effects. After a decade of employing the molecular diagnosis of those viruses, which replaced conventional virus isolation, we present the development of a real-time multiplex PCR for the simultaneous detection of both viruses. The real-time PCRs for MDV and for CAV alone are more sensitive than the respective end-point PCRs. In addition, the multiplex real-time shows a similar sensitivity when compared to the single real-time PCR for each virus. The newly developed real-time multiplex PCR is of importance in terms of the diagnosis and detection of low copies of each virus, MDV and CAV in single- and in multiple-virus infections, and its applicability will be further evaluated.Cuantificación del virus de la enfermedad de Marek y del virus de la anemia infecciosa en los órganos de pollos infectados experimentalmente y de pollos comerciales mediante una prueba de PCR múltiple en tiempo real.La distribución mundial del virus de la anemia infecciosa del pollo (CAV) y del virus de la enfermedad de Marek (MDV) está bien documentada. Además de su importancia económica en infecciones simples o por los dos virus. Estos dos agentes a menudo pueden acompañar otros patógenos diversos y afectan a la salud de las aves de corral, ya sea directamente, por los tumores que causan, por la anemia o por retraso en el crecimiento, o indirectamente, al aumentar la severidad de otras enfermedades, como consecuencia de sus efectos inmunosupresores. Después de una década de emplear el diagnóstico molecular, que sustituyó el aislamiento viral convencional, se presenta el desarrollo de un método de PCR múltiple en tiempo real para la detección simultánea de ambos virus. Los métodos de PCR en tiempo real para el virus de Marek y para el virus de la anemia por separado son más sensibles que los respectivos métodos de PCR de punto final. Además, el procedimiento de PCR múltiple en tiempo real muestra una sensibilidad similar en comparación con los métodos de PCR en tiempo real por separado para cada virus. El método de PCR múltiple en tiempo real recién desarrollado es de importancia en términos de diagnóstico y para la detección de bajos niveles de copias para cada virus, para diagnosticar infecciones simples o múltiples y su aplicabilidad se seguirá evaluando.