An efficient micro-method of DNA isolation from mature leaves of four hardwood tree species Acer, Fraxinus, Prunus and Quercus

Abstract

It is difficult to purify DNA from mature tree leaves at the end of the growing season, because of their thick cell wall, and high content in polysaccharides, phenolic compounds and endonucleases. A simple, fast and efficient method for DNA purification from 100 mg fresh weight leaf samples is described here. It has been developed for extracting DNA from mature leaves of Quercus, Fraxinus Prunus and Acer. The protocol is a modified CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide) method including a combina- tion of β-mercaptoethanol, polyvinylpyrrolidone, sodium dodecyl sulfate and lithium chloride including short centrifugation runs. It is very efficient yielding up to 950 μg DNA/g of fresh weight, even when very mature leaves are processed. The extracted DNA was used as template to characterise oaks by microsatellite analysis. Its efficiency has been compared to four commercially available kits and two other published. CTAB protocols. The protocol is also inexpensive compared to commercial kits. ( © Inra/Elsevier, Paris.) Acer / DNA purification / Fraxinus / Prunus / Quercus Rsum -Une micro-mthode d'extraction d'ADN partir de feuilles matures de quatre espces d'arbres forestiers Acer, Fraxinus, Prunus et Quercus. Il est difficile de purifier l'ADN de feuilles d'arbres maturit et spcialement la fin de la priode de croissance c'est--dire en automne, pour plusieurs raisons, telles que de fortes concentrations de polysaccharides, de composs phnoliques et d'endonuclases ainsi que des parois cellulaires paisses. Nous dcrivons une micro-mthode efficace et rapide per- mettant de purifier de l'ADN partir de 100 mg de poids frais de feuilles maturit des espces d'arbres suivantes : Quercus robur, Q. petraea, Fraxinus excelsior, Prunus avium et Acer pseudoplatanus. Le protocole est bas sur l'utilisation de bromure d'hexad- cyltrimthylammonium (CTAB) combin a l'emploi de β-mercaptothanol, de polyvinylpyrrolidone, de sodium dodcyl sulfate et de chlorure de lithium. Cette micro-mthode permet d'obtenir jusqu' 950 μg DNA / g de poids frais. L'ADN, extrait d'une varit de matriels vgtaux (culture in vitro, matriel de serre ou prlevs en fort) par cette mthode, est de la qualit ncessaire aux tech- niques de biologie molculaire (digestion enzymatique, clonage ou amplification par la raction de la polymrase en chane (PCR) de marqueurs microsatellites). Son efficacit compare celle de quatre protocoles commercialiss et deux autres protocoles bass sur l'emploi de CTAB est suprieure en rendement et qualit. Ce protocole a enfin l'avantage d'tre bon march par rapport aux protocles commerciaux. (© Inra/Elsevier, Paris.)