<i>Agrobacterium</i>-mediated transformation of <i>Populus × euramericana</i> "Ogy" using the chimeric CaMV 35S-<i>pin</i>2 gene fusion

Abstract

Les auteurs ont transforme genetiquement un clone hybride de peuplier nomme « Ogy » (Populus x euramericana) avec le gene (pin2) codant pour l'inhibiteur de la proteinase de classe II (PI II) de la pomme de terre afin de verifier l'importance des proteinases de la serine dans les interactions hotes-pathogenes et hotes-insectes. Le produit de ce gene, PI II, est un inhibiteur specifique a la trypsine et a la chymotrypsine. Les genotypes transformes furent obtenus a l'aide d'un systeme binaire du vecteur Agrobacterium muni d'un plasmide Ti desarme (EHA 101) et du plasmide pRT104 contenant le gene pin2 assujetti au controle regulateur du promoteur 35S du CaMV, ainsi que d'un gene de selection codant pour la neomycine phosphotransferase II (NPT Il). Des tiges presumement transformees provenant de la co-culture de feuilles furent selectionnees a l'aide de trois tests differents de toxicite a la kanamycine. A partir de 431 tiges issues de la co-culture, 10 plantules furent choisies et soumises a l'analyse des acides nucleiques et des proteines. L'analyse de l'ADN (hybridations Southern et PCR) ainsi que les hybridations de proteines sur gel (hybridations Western) ont confirme l'integration du gene pin2 et son expression dans la lignee transformee TR5.